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02 網織紅細胞實驗原理(血液病要做血液檢驗項目有哪些)
Instagram刷粉絲, Ins買粉絲自助下單平台, Ins買贊網站可微信支付寶付款2024-07-07 06:57:27【】5人已围观
简介-G.此外尚需GTP供能加速翻譯過程。1.進位即新的氨基酰-tRNA進入50S大亞基A位,并與mRNA分子上相應的密碼子結合.在70S起始復合物的基礎上,原來結合在mRNA上的fMet-tRNAMet
1.進位即新的氨基酰-tRNA進入50S大亞基A位,并與mRNA分子上相應的密碼子結合.在70S起始復合物的基礎上,原來結合在mRNA上的fMet-tRNAMet占據著50S亞基的P位點(當延長步驟循環進行二次以上時,在P位點則為肽酰-tRNA)新進入的氨基酰-tRNA則結合到大亞基的A位點,并與mRNA上起始密碼子隨后的第二個密碼子結合。此步需GTP、EF-T及Mg2+的參與。
2.肽鍵形成在大亞基上肽酰轉移酶(見第四章)的催化下,將P位點上的tRNA所攜帶的甲酰蛋氨酰(或肽酰基)轉移給A位上新進入的氨基酰-tRNA的氨基酸上,即由P位上的氨基酸(或肽的3'端氨基酸)提供α-COOH基,與A位上的氨基酸的α-NH2基形成肽鏈。此后,在P位點上的tRNA成為無負載的tRNA,而A位上的tRNA負載的是二肽酰基或多肽酰基。此步需Mg2+及K+的存在。
3.脫落即50S亞基P位上無負載的tRNA(如tRNAMet)脫落。
4.移位指在EF-G和GTP的作用下,核糖體沿mRNA鏈(5'→3')作相對移動。每次移動相當于一個密碼子的距離,使得下一個密碼子能準確的定位于A位點處。與此同時,原來處于A位點上的二肽酰tRNA轉移到P位點上,空出A位點。隨后再依次按上述的進位、肽鍵形成和脫落步驟進行下一循環,即第三個氨基酰-tRNA進入A位點,然后在肽酰轉移酶催化下,P位上的二肽酰tRNA又將此二肽基轉移給第三個氨基酰-tRNA,形成三肽酰tRNA。同時,卸下二肽酰的tRNA又迅速從核糖體脫落。像這樣繼續下去,延長過程每重復一次,肽鏈就延伸一個氨基酸殘基。多次重復,就使肽鏈不斷地延長,直到增長到必要的長度。通過實驗已經證明,mRNA上的信息的閱讀是從多核苷酸鏈的5'端向3'端進行的,而肽鏈的延伸是從N端開始的。
【3】.肽鏈合成的終止,需終止因子或釋放因子(releasing factor簡寫為RF)參與。在E.買粉絲li中已分離出三種RF:RF1(MW36000),RF2(MW38000和RF3(MW46000)。其中,只有RF3與GTP(或GDP)能結合。它們均具有識別mRNA鏈上終止密碼子的作用,使肽鏈釋放,核糖體解聚。
1.多肽鏈的合成已經完畢,這時,雖然多肽鏈仍然附著在核蛋白體及tRNA上,但mRNA上肽鏈合成終止密碼子UAA(亦可以是UAG或UGA)已在核蛋白體的A位點上出現。終止因子用以識別這些密碼子,并在A位點上與終止密碼子相結合,從而阻止肽鏈的繼續延伸。RF3的作用還不能肯定,可能具有加強RF1和RF2的終止作用。RF1和RF2對終止密碼子的識別具有一定特異性,RF1可識別UAA和UAG,RF2識別UAA和UGA。RF與EF在核糖體上的結合部位是同一處,它們重疊的結合部位與防止了EF與F同時結合于核糖體上,而擾亂正常功能。
2.終止因子可能還可以使核蛋白體P位點上的肽酰轉移酶發生變構,酶的活性從轉肽作用改變為水解作用,從而使tRNA所攜帶的多肽鏈與tRNA之間的酯鍵被水解切斷,多肽鏈從核蛋白體及tRNA釋放出來。
最后,核蛋白體與mRNA分離;同時,在核蛋白體P位上的tRNA和A位上的RF亦行脫落。與mRNA分離的核蛋白體又分離為大小兩個亞基,可重新投入另一條肽鏈的合成過程。核蛋白體分離為大小兩個亞基的反應需要起始因子(IF3)的參與。必須指出,上述只是單個核蛋白體的循環,即單個核蛋白體的翻譯過程。采用溫和的條件小心地從細胞中分離核蛋白體時,可以得到3-4個甚至上百個成串的核蛋白體。稱為多核蛋白體,即在一條mRNA鏈上同一時間內結合著許多個核蛋白體,兩個核蛋白體之間有一定的長度間隔,是裸露的mRNA鏈段,所以多核蛋白體可以在一條mRNA鏈上同時合成幾條多肽鏈,這就大提高了翻譯的效率。在開始合成蛋白質時,一個核蛋白體先附著在mRNA鏈的起始部位,再沿著mRNA鏈由5'端向3'端移動,根據mRNA鏈的信息,有次序的接受攜帶基酰的各種tRNA,并合成多種肽鏈。當這一核蛋白體移動到足夠遠的位置時,另一核蛋白體又可附著此mRNA的起始部位,并開始合成另一條同樣的多肽鏈。每當一個核蛋白體又可到此mRNA的終止密碼子時,多肽鏈即合成完畢,并從核蛋白體及tRNA上釋出。同時,此核蛋白體隨之從mRNA鏈上脫落分離為兩個亞基,而脫落下來的大小亞基又可重新投入核蛋白體循環的翻譯過程。多核蛋白體中的核蛋白體個數,視其所附著的mRNA大小而定。例如,血紅蛋白的多肽鏈約由150個氨基酸殘基組成,相應的mRNA的編碼區應有450個堿基組成的多核苷酸,長約150nm。網織紅細胞核蛋白體的直徑為22nm,所以每條mRNA足以容納好幾個核蛋白體。現已證明,網織紅細胞多核蛋白體由5-6個核蛋白體串連而成,兩個核蛋白體之間的間隔約為3nm。肌球蛋白(即肌凝蛋白)的重鏈由1800個氨基酸殘基組成,相應的mRNA鏈的編碼區應當是5400個核苷酸組成的長鏈,多核蛋白體由60多個核蛋白體串連而成。
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