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01 影響網織紅細胞計數實驗的因素有哪些如何避免(如何對網織紅細胞顯微鏡計數法進行質量控制)
Instagram刷粉絲, Ins買粉絲自助下單平台, Ins買贊網站可微信支付寶付款2024-07-15 01:24:49【】8人已围观
简介影響網織紅細胞計數的因素有哪些影響網織紅細胞計數標準性的因素為染液的質量、計數紅細胞的個數、染色溫度和時間、網織紅細胞的辨認水平。網織紅細胞計數:(一)原理網織紅細胞是晚幼紅細胞脫核后但尚未完全成熟的
影響網織紅細胞計數的因素有哪些
影響網織紅細胞計數標準性的因素為染液的質量、計數紅細胞的個數、染色溫度和時間、網織紅細胞的辨認水平。網織紅細胞計數:
(一)原理網織紅細胞是晚幼紅細胞脫核后但尚未完全成熟的紅細胞,胞質中尚有核糖體、核糖核酸等嗜堿性物質殘存,經煌焦油藍或新亞甲藍活體染色后,胞質中可見藍或藍綠色枝點狀甚至網織狀結構。
(二)方法活體染色法.近年來還可通過某些血液自動分析儀及流式細胞術檢測法進行網織紅細胞計數。
(三)參考值(活體染色法)
成人和兒童:0.005-0.015
新生兒:0.02-0.06
網織紅細胞絕對值:(24-84)×10^9/L
(四)臨床意義
網織紅細胞計數反應骨髓造血功能的重要指標。
網織紅細胞增多表示骨髓紅系增生旺盛,常見于溶貧、急性失血、缺鐵貧、巨幼貧等,網織紅細胞減少表示骨髓造血功能減低,常見于再障、骨髓病性貧血。
影響網織紅細胞計數的因素有哪些
【參考范圍】
成人:絕對值(22~84)×10^9/L. 百分率:0.005~0.015(儀器法)。
兒童:百分率0.03~0.06(儀器法)。
熒光染色激光流式細胞技術:LFR(低熒光強度比率):0.813~0.909(儀器法)。
MFR(中熒光強度比率):0.072~0.154(儀器法)。
HFR(高熒光強度比率):0.009~0.043(儀器法)。
【影響因素】
標本應嚴格使用EDTA-K2抗凝靜脈血,不能用肝素或枸櫞酸鹽抗凝;抽血量1ml,抽血后立即輕輕顛倒混勻,注意切勿用力振搖,以免造成標本溶血。
影響血細胞計數準確性的因素有哪些如何
血細胞計數的誤差分別來源于技術誤差和固有誤差。其中由于操作人員采血不順利,器材處理、使用不當,稀釋不準確,細胞識別錯誤等因素所造成的誤差屬技術誤差;而由于儀器(計數板、蓋片、吸管等)不夠準確與精密帶來的誤差稱儀器誤差,由于細胞分布不均勻等因素帶來的細胞計數誤差屬于分布誤差或計數域誤差(filed error)。儀器誤差和分布誤差統稱為固有誤差或系統誤差。技術誤差和儀器誤差可通過規范操作、提高熟練程度和校正儀器而避免或糾正,但細胞分布誤差卻難于徹底消除。因此,搞好細胞計數的質量控制一般需采用以下措施。
1.避免技術誤差,糾正儀器誤差
(1)所用器材均應清潔干燥,計數板、血蓋片、微量吸管及刻度吸管的規格應符合要求或經過校正。①計數板的鑒定:要求計數室的臺面光滑、透明,劃線清晰,計數室劃線面積準確。必要時采用嚴格校正的目鏡測微計測量計數室的邊長與底面積,用微米千分尺測量計數室的深度。美國國家標準局(NBS)規定每個大方格邊長的誤差應小于1%,即1±0.01mm,深度誤差應小于2%,即0.1±0.002mm。若超過上述標準,應棄之不用。②血蓋片應具有一定的重量,平整、光滑、無裂痕,厚薄均勻一致,可使用卡尺多點測量(至少在9個點),不均勻度在0.002mm之內。必要時采用平面平行儀進行測量與評價,要求呈現密集平行的直線干涉條紋。最簡單的評價方法是將潔凈的蓋片緊貼于干燥的平面玻璃上,若能吸附一定的時間不脫落,落下時呈弧線形旋轉,表示蓋片平整、厚薄均勻。同時,合格的蓋片放置在計數室表面后,與支持柱緊密接觸的部位可見到彩虹。精選出的蓋片與其他蓋片緊密重合后,在掠射光線下觀察,如見到完整平行的彩虹條紋表示另一枚蓋片質量也符合要求。③目前臨床實驗室多采用一次性微量采血管采集毛細血管血,除注意定點購買使用信譽較好廠家的產品外,還應對每一批量的采血管進行抽樣檢查,可通過水銀稱重法或有色溶液比色法進行校正,誤差不應超過±1%。
(2)細胞稀釋液應新鮮、無雜質微粒。
(3)嚴格操作,從消毒、采血、稀釋、充池到計數都應規范,尤其應注意的是血樣稀釋及充池時既要作到充分混勻,又要防止劇烈震蕩為破壞紅細胞。必須一次性充滿計數室,防止產生氣泡,充入細胞懸液的量以不超過計數室臺面與血蓋片之間的矩形邊緣為宜。
(4)報告法定計量單位。
2.縮小計數域誤差或分布誤差 由于血細胞在充入計數室后呈隨機分布或稱Poisson分布( ),而我們所能計數的細胞分布范圍是有限的,由此造成的計數誤差稱為計數域誤差或分布誤差。縮小這種誤差的有效方法就是盡量擴大細胞計數范圍和計數數目,一般先進行誤差估計,然后決定所需計數的數目和計數范圍,只要能將誤差控制在允許范圍內即可。Berkson指出,當使用同一支吸管、同一面計數室,計數0.2mm2面積的細胞數,有望將 CV控制在可接受的7%以內。對于紅細胞計數而言,由于紅細胞數量較多,在計數室中顯得比較“擁擠”,根據Poisson公式( )推斷, 。欲將誤差控制在變異百分數5%以內,至少需要在計數室中計數400個紅細胞,因此要求計數五個中方格的紅細胞。事實上Berkson還通過實驗證明,紅細胞的計數域誤差為s=0.92 ,較理論誤差(Poisson分布誤差)要小。
3.排除異常標本的干擾 白細胞數量在正常范圍時,相對于紅細胞數量來講,其影響可忽略,但如白細胞過高(>100×109/L),則應對計數結果進行校正。方法是:①實際RBC=計得RBC-WBC。如當紅細胞換算后為3.5×1012/L、白細胞換算后為100×109/L時,病人實際紅細胞數應為3.4×1012/L。②在高倍鏡下計數時,避開有核細胞。有核細胞體積比正常紅細胞大,中央無凹陷,無草黃色折光,可隱約見到細胞核。此外,當病人急性嚴重貧血時網織紅細胞可提前大量釋放,也給紅細胞計數帶來一定的干擾,而且影響網織紅細胞絕對值計算結果。其校正方法有待探討
如何對網織紅細胞顯微鏡計數法進行質量控制?
①目前網織紅細胞顯微鏡計數誤差較大,應首選Miller窺盤計數;②用煌焦油藍乙醇染液時,應待乙醇完全揮發干后方能加入血液,否則可使血液凝固;③染色時間一定要充足;④染色時溫度控制在37℃為宜;⑤試管法檢測網織紅細胞時染液與血液的比例以1:1為宜,嚴重貧血時,可適量增加血液的比例;制片時血膜不宜太薄或太厚,否則會造成網織紅細胞分布不勻
網織紅細胞計數
網織紅細胞 Miller;窺盤法;儀器法
Key words:Reticulocyte;Miller ocular;Analyzer
網織紅細胞是骨髓最新被釋放到外周血的成熟紅細胞的前提紅細胞,同成熟紅細胞相比,其細胞內仍殘存小量的RNA(嗜堿性物質),是反映骨髓造血功能的早期指標。目前測定網織紅細胞的自動分析儀主要有:多參數流式細胞儀(FCM),某些全自動血液分析儀,如:Sysmex-R系列分析儀,Miles H3型血液分析儀,Coulter Maxm型分析儀,Abbott CD3500血液分析儀[1,2]。國內多采用顯微鏡目測法。現將Sysmex-R3500分析儀,COULTER MAXM分析儀與Miller窺盤法的測定結果進行探討。
1 材料與方法
1.1 材料
(1)SYSMEX-R3500分析儀:日本希森美康株式會社生產。原裝試劑盒和質控物,批號分別是ZA9004,11130091。(2)COULTER MAXM 分析儀:美國COULTER 公司生產。原裝試劑盒和質控物,批號分別是109155,105379K。試劑盒由試劑A與試劑B組成,其主要成分分別是0.06%新亞甲藍與0.08%硫酸。(3)Miller窺盤法的試劑盒:由TONYAR DIAGNOSTICS.INC生產的ASK BCB Solution,批號A10。成分為焦油藍4 g/L與氯化鈉9 g/L。
1.2 方法
(1)SYSMEX-R3500分析儀測定原理:熒光染料堿性槐黃(或者全胺O)(Auramine O,AO)與網織紅細胞內RNA結合,以氬激光束為光源進行測定。操作步驟:混勻血液,直接測定網織紅細胞。(2)COULTER MAXM 分析儀測定原理:血液標本與新亞甲藍孵育活體染色,加入酸性試劑,使紅細胞內的血紅蛋白溢出,保存被染色的RNA于細胞內,細胞通過測定體積,高頻傳導性以及激光散射(VCS)而進行分析,測定出網織紅細胞。操作步驟:向A管加入4滴與50 μl血液標本,混勻,室溫16℃~30℃放置5 min~60 min.取A管液體2 μl于B管,加入試劑B液2 ml,等30 s,手動進樣檢測。(3)Miller窺盤法原理:煌焦油藍活體染色法。操作步驟:見全國臨床檢驗操作規程。為了重復性好,CV值較低,本次實驗采取了計數500個紅細胞內的網織紅細胞百分數。(4)測定SYSMEX-R3500,COULTER MAXM的批內,批間精密度,并與Miller窺盤法進行比較。分別用SYSMEX-R3500分析儀,COULTER MAXM分析儀與Miller窺盤法對130份正常人標本進行網織紅細胞測定,方差分析統計結果
一位熟練的檢驗工作人員對同一標本用Miller窺盤法重復測定15次,結果如下:均值=1.177 5(0.52~1.89),S=0.321 9,CV(%)=27.34。
2.7 用SYSMEX-R3500分析儀,COULTER MAXM分析儀,顯微鏡目測法(Miller窺盤法)同時測定130份血常規在正常范圍的標本。結果F=3.87,P<0.05,差異有顯著性。差異性分析(見表6),相關性分析(見表7)。表6 差異性分析(略)表7 直線相關性分析(略)注:※差異無顯著性,★差異有顯著性,★★差異有極顯著性,△相關。
有關網織紅細胞計數臨床意義,錯誤的敘述是
【答案】:C
網織紅細胞的臨床意義:1、判斷骨髓紅細胞造血情況:(1)增多:①溶血性貧血;②放療、化療后;③紅系無效造血。(2)減少:見于再生障礙性貧血、溶血性貧血再障危象。2、觀察貧血療效 :缺鐵性貧血、巨幼細胞性貧血患者治療前,網織紅細胞計數僅輕度增高(也可正常或減少),給予鐵劑或維生素B12、葉酸治療后,用藥3~5天后,網織紅細胞計數開始上升。3、骨髓移植后監測 ,4、網織紅細胞生成指數(RPI)。
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